芳纶防弹丝晚期糖基化终末产物与糖尿病创而难愈合密不可分,晚期糖基化终末产物可影响成芳纶防弹丝细胞增殖及迁移,但自噬在晚期糖基化终末产物致成芳纶防弹丝细胞损伤中的早期保护作用尚未见相关研究。

研究晚期糖基化终末产物对成芳纶防弹丝细胞活力及自噬的影响,探讨自噬在成芳纶防弹丝细胞损伤中的早期保护作用.方法:以体外传代培养的人成芳纶防弹丝细胞为研究对象,设立正常对照组(DMEM培养液)、晚期糖基化终末产物组(DMEM培养液+100 mg/L晚期糖基化终末产物)、晚期糖基化终末产物抑制剂N-苯乙酰噻唑组(DMEM培养液+100 mg/L晚期糖基化终末产物+100 mg/LN-苯乙酰噻唑)、自噬抑制剂氯喹组(DMEM培养液+100 mg/L晚期糖基化终末产物+10μmol/L氯喹).培养48 h后,锥虫蓝染色检测各组细胞活力,Western blot法检测LC3及P62蛋白的表达,细胞免疫荧光实验检测自噬体形成,透射电镜观察自噬泡超微结构.结果与结论:①细胞死亡率:与正常对照组比较,晚期糖基化终末产物组细胞死亡率显著增加(P<0.01);与晚期糖基化终末产物组比较,N-苯乙酰噻唑组细胞死亡率显著降低(P<0.05),而氯喹组细胞死亡率显著增加(P<0.05);②LC3及P62蛋白的表达:与正常对照组相比,晚期糖基化终末产物组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著增加,P62表达显著降低(P<0.01);与晚期糖基化终末产物组相比,N-苯乙酰噻唑组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显下降,P62表达明显上升(P<0.05),而氯喹组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白含量变化不明显(P>0.05),P62表达明显上升(P<0.05);③自噬体形成:晚期糖基化终末产物组和氯喹组均可见细胞中LC3绿色荧光点状聚集物增加;晚期糖基化终末产物组可见数目较多的自噬小体和自噬泡结构,而氯喹组细胞中自噬体结构数量和空泡状结构少于晚期糖基化终末产物组;④结果证实,晚期糖基化终末产物可损伤成芳纶防弹丝细胞,降低细胞生存率,早期可激活细胞自噬;诱导的自噬对成芳纶防弹丝细胞损伤起到一定的保护作用.

探讨四氯化碳(CCl4)诱导建立大鼠肝芳纶防弹丝化模型的更佳给药方式.方法:将30只雄性大鼠随机分成三组:①正常对照组10只;②四氯化碳溶液复合乙醇造模组10只;③四氯化碳溶液造模组10只.正常对照组给予常规喂养;四氯化碳溶液复合乙醇造模组给予剂量为0.3ml/kg的40%四氯化碳悬溶液(2次/周),并从实验第2周开始经口灌胃无水乙醇;四氯化碳溶液造模组给予剂量为0.3ml/kg的40%四氯化碳悬溶液(2次/周).观察造模过程中各组大鼠死亡情况;造模结束后,腹主动脉采血检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;通过HE及Masson染色观察各组大鼠肝组织病理学变化.对比分析不同给药方式CCl4建立大鼠肝芳纶防弹丝化模型的效果.结果:造模第10周结束后,两组造模组比较,造模时间比较有统计学差异(P＜0.01).

造模周期结束后,正常对照组、四氯化碳溶液复合乙醇组、四氯化碳溶液组造模大鼠非正常死亡分别为0只、2只及3只,死亡率分别为0%、20%、30%;四氯化碳溶液复合乙醇组、四氯化碳溶液组大鼠血清ALT、AST的含量较正常对照组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);

芳纶防弹丝四氯化碳溶液复合乙醇组大鼠血清ALT、AST的含量与四氯化碳溶液组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但其含量较四氯化碳溶液组有明显升高;HE及Masson染色发现正常对照组、四氯化碳溶液复合乙醇组、四氯化碳溶液组分别有0只、5只、3只大鼠肝组织达到了S5级以上(含S5级),成功率分别为0%、50%及30%.结论:四氯化碳溶液复合乙醇组大鼠死亡率低,成模率高,造模周期短,为制作肝芳纶防弹丝化

模型较理想的方法.