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芳纶防弹丝新型发现
时间:2020-07-16 点击次数:1685

芳纶防弹丝miR-93-5p是心肌梗死中新发现的差异微小RNA(miRNA),探索其在心脏成芳纶防弹丝细胞中的功能机制.方法 用差速贴壁法分离心肌梗死小鼠心脏成芳纶防弹丝细胞和心肌细胞;

脂质体法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-93-5p mimic组(转染miR-93-5p mimic)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、miR-93-5p inhibitor组(转染miR-93-5p inhibitor)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-弗林蛋白酶(Furin)组(转染pcDNA-Furin)、si-NC组(转染si-NC)、si-Furin组(转染si-Furin)、miR-93-5p mimic+pcD-NA组载体(共转染miR-93-5p mimic和pcDNA)、miR-93-5p mimic+pcDNA-Furin组(共转染miR-93-5p mimic和pcDNA-Furin)转染至分离的成芳纶防弹丝细胞.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹(W estern blot)检测细胞中m iR-93-5p、Furin、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、成芳纶防弹丝细胞基质金属蛋白酶抑制物-2蛋白(TIMP2)、芳纶防弹丝连接蛋白(Fibronectin)的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果 心肌梗死小鼠心脏成芳纶防弹丝细胞与心肌细胞相比,m iR-93-5p、Furin的表达均显著升高(P<0.05).过表达m iR-93-5p、敲减Furin能明显抑制成芳纶防弹丝细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP2、Fibronectin的表达,而抑制miR-93-5p、过表达Furin则具有相反的作用.miR-93-5p直接抑制野生型Furin细胞的荧光素酶活性,并且过表达Furin还可部分逆转m iR-93-5p对心脏成芳纶防弹丝细胞的芳纶防弹丝化调控.结论 m iR-93-5p可抑制心肌梗死心脏成芳纶防弹丝细胞的芳纶防弹丝化,其机制与靶向Furin有关.

严重烧伤可致眼表结膜组织大量坏死,并导致角膜基质持续性炎症反应及溃疡形成.本研究探讨结膜成芳纶防弹丝细胞坏死上清产生的警报素(alarmins)对人角膜基质成芳纶防弹丝细胞(HCFs)释放促炎因子及粘附分子的影响.方法 通过冻融方法制备结膜成芳纶防弹丝细胞坏死上清(NHCS),用NHCS、IKK2抑制剂、IL-1及TNF-α受体拮抗剂对HCFs进行处理.ELISA检测IL-6、IL-8及MCP-1的表达,Western blot分析ICAM-1表达及IκB-α磷酸化,免疫荧光染色检测NF-κB p65亚基定位.结果 NHCS可刺激HCFs表达IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1,激活IκB-α磷酸化,并介导NF-κB p65亚基的核内转移.此外,IKK2抑制剂、IL-1及TNF-α受体拮抗剂可抑制NHCS诱导的上述炎性介质的表达.结论 由结膜成芳纶防弹丝细胞坏死上清产生的警报素包括IL-1和TNF-α,可通过激活NF-κB信号通路促进角膜基质成芳纶防弹丝细胞表达促炎因子和粘附分子.IL-1和TNF-α可能成为改善严重眼烧伤角膜基质炎症反应的潜在治疗靶

研究报道大蒜素具有抗芳纶防弹丝化作用,可抑制过度增生的成芳纶防弹丝细胞增殖和胶原合成能力,但大蒜素抑制成芳纶防弹丝细胞增殖及诱导其凋亡的确切机制尚未明确.目的:探讨大蒜素抑制硬膜外瘢痕来源的成芳纶防弹丝细胞增殖、迁移并诱导其凋亡的作用机制,为防治硬膜外粘连提供新思路.方法:培养人体硬膜外瘢痕来源的成芳纶防弹丝细胞至对数增长期,用不同质量浓度梯度大蒜素处理24 h.采用荧光显微镜观察细胞形态,CCK-8试验检测细胞增殖,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及实时定量PCR技术检测细胞增殖、凋亡相关蛋白和基因表达水平.结果与结论:

芳纶防弹丝①大蒜素处理24 h后,成芳纶防弹丝细胞萎缩变形,体积变小,细胞核固缩、碎裂;②细胞增殖能力和迁移率均呈剂量依赖性下降(P<0.01);③G1期细胞比例呈剂量依赖性升高(P<0.01),而S期和G2期呈剂量依赖性下降(P<0.01),流式细胞仪结果显示凋亡细胞比例呈剂量依赖性升高(P<0.01);④与对照组(未加入大蒜素处理组)相比,细胞核增殖抗原及Bcl-2在蛋白与mRNA水平的表达均显著降低(P<0.01),而Bax表达显著增高(P<0.01);⑤说明大蒜素具有抑制硬膜外瘢痕来源的成芳纶防弹丝细胞增殖、迁移并促其凋亡的作用,可能与调控细胞核增殖抗原、Bcl-2及Bax表达有关.


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